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第134章黎明前的测序(第1/2页)
徐文培从书房的椅子上站了起来。
他道：
「绕过地方疾控，直接走加急测序通道，得是国家级的公共卫生警报，不可能只凭几个重症病例就越级上报。」
江河迅速汇报：
「患者42岁，既往体健，在48小时内从普通发热进展为双肺大面积实变，血氧跌破88%，更重要的是，接触过他的翻译现在在省人民医院插管，负责打扫他房间的保洁在市八医院昏迷，常规的甲流快筛是阳性，但大剂量的奥司他韦用下去毫无反应。」
徐文培沉默。
过了会，又问：「你确认过流行病学链条吗？」
「嗯，他们在三天内都有明确的时空交集点，现在常规的流程需要市级、省级疾控逐级分离培养，最快也要两到三周才能出全基因组序列，三周时间，广交会数万外商和本地人口足够把这个病毒带到全国甚至全世界。」
江河顿了顿，道：「我只需要您帮我联系病毒病所的核心研究员，把通道打通，证据，我今晚自己做出来发给他们。」
「你自己做？」徐文培眉头紧锁，「你去哪弄P3实验室和测序仪？」
「这个我来解决，只要拿到关键靶点的突变基因序列，我就直接通过邮件发您，有了序列对比，流程就能合法合规提速。」
徐文培站在窗前，无言思量着。
於他而言，一个大三学生，哪怕发了顶刊，但在大流行传染病面前，依然显得过於年轻。
但……江河的忙，自己必须得帮。
「好，我认识病毒病所的舒跃龙研究员，人不错，如果你能拿出证明它不是季节性流感的测序片段，我就有信心说服他让他直接介入。」
「好的，谢谢徐主任。」
挂断电话，江河转身走回医务科办公室。
杨煦和柯正还在等他。
江河：「老师，我想借用孙长明教授的肿瘤研究所中心实验室，全院只有那里有ABI3130xl基因分析仪和高标准的生物安全柜，还有，我需要柯医生立刻去给马克做一次深部支气管肺泡灌洗，把灌洗液样本交给我。」
杨煦看着江河，他意识到自己的学生要干什麽了。
随之，惊讶的无以复加。
柯正又震惊又担忧，道：「你要自己做核酸提取和基因测序？可你只是个学生啊，如果在实验室里发生泄露或者暴露怎麽办？这违规了吧？」
「所以样本需要柯医生在病房里加入含有硫氰酸胍的裂解液，硫氰酸胍会瞬间使病毒的蛋白质外壳变性，彻底灭活病毒，同时抑制RNA酶的活性。」
江河道：「灭活後的样本送到实验室，就不再具备传染性，实验室里的操作只需要常规的生物安全防护级别就足够了，这在流程上没有违规。」
柯正被江河严密的逻辑堵得说不出话来。
杨煦终於从惊讶中缓过神来。
今天晚上，全程开启自动跟随的他，又被自己学生震撼到了。
於是便不再犹豫，站起身，拨通了孙长明的电话。
淩晨两点，电话响了很久才被接起。
孙长明：「老杨？干什麽？怕我跟你抢媳妇，也不能不让我睡觉吧？」
杨煦：「长明，借你的中心实验室用一晚，PCR仪、离心机、通风橱、还有ABI测序仪，包括冷库里的试剂盒，我全都要用。」
孙长明清醒了些：「你个搞肝胆外科的用什麽测序仪？你要干嘛？」
「江河要用。」杨煦说。
电话那头沉默了两秒。
随後，孙长明龙颜大悦：「你同意让江河加入我的实验室了？孺子可教也……」
杨煦：「别开玩笑了，正事。」
「呃……正事吗？抱歉。」
如果是别人，孙长明肯定还要多问几句。
但要借设备的人是江河，孙长明就没多问了。
「……行，我给值班的安保打电话开门，仪器随便用，试剂用多少记下来，让他以後从自己的项目经费里扣。」
「谢了。」杨煦挂断电话，「实验室搞定了，但提取病毒RNA和跑PCR是个精细活，一个人一晚上不可能做的完。」
「对，所以我准备叫人。」
江河拿出手机，点开miRNA早筛项目组的群聊。
淩晨2:10。
江河：【所有人，看到消息立刻回复，半小时内，附一院孙长明教授肿瘤研究所中心实验室门口集合。】
消息发出去不到三十秒。
陈浩：【收到！我来给所有人打电话！】
程溪瑶：【已经在穿衣服了。】
顾亦舟：【我离得近，五分钟到。】
陆晓林：【收到。】
没有人问为什麽，没有人抱怨现在是淩晨两点。
二十分钟後，肿瘤研究所中心实验室大门外。
陈浩连扣子都扣错了，程溪瑶的头发随便用皮筋紮在脑後。
江河站在实验室门口等他们。
陈浩问：「老江，大半夜的，出什麽事了？嫂子呢？」
江河简单回答：「你嫂子在酒店，附一院有紧急情况，我们要连夜做个研究。」
「啊？」程溪瑶一愣，「嫂子来了？」
「这不是重点吧！」易向晚有些紧张道，「原来是紧急情况吗？可是老大，咱都是新手啊？你怎麽不去找附一院检验科的人？」
答案很简单。
检验科的老师们有自己的操作习惯。
如果江河去指挥他们，他们会质疑为什麽不加这个试剂，为什麽要改那个参数。
沟通成本极高。
但这六个人不同。
过去的一段时间里，江河给他们进行了地狱般的RNA提取理论授课。
他们对江河的话言听计从，执行江河的作业程序不会有任何折扣。
所以，江河道：「听好，医院收治了一例极高危的不明原因重症肺炎患者，现在我怀疑是一种新型的重组流感病毒，我们需要在今晚，提取出病毒的RNA，逆转录成A，跑出PCR扩增片段，然後上机测序，拿到它的基因序列证明。」
六个人：「？？？」
唐培：「老，老大……这什麽未知病毒的，我们做……安全吗？」
「送来的样本是经过硫氰酸胍彻底裂解灭活的，它现在只是一堆核酸物质，没有传染性，这和我们前几天培训的提取外周血游离miRNA的底层逻辑完全一致，甚至因为我们要提取的是病毒的基因组RNA，丰度更高，操作上反而更容易。」
「重点是，防止环境里的RNA酶降解样本。」
江河严肃道：「你们是我亲自教出来的，我对你们的实验规范有绝对的信心，今晚的操作，每一步都必须严格按照我教的规范来，不许有任何多余的动作，听明白了吗？」
「明白！」陆晓林年纪最长，第一个出声回应。
「明白了老江，你说咋干就咋干。」陈浩拍了拍脸，让自己彻底清醒。
「去更衣室，穿两层隔离衣，戴双层乳胶手套，N95口罩，护目镜，进核心区。」
淩晨3:15。
柯正提着一个密封的生物安全转运箱来到了实验室门口。
他把箱子交给江河：「江河，这是马克的深部支气管肺泡灌洗液，已经加了裂解液灭活了。」
「好。」
江河接过箱子，转身刷卡进入实验室核心区，立刻说道：
「第一组，陈浩、向晚，你们负责配制试剂，所有的DEPC水、无水乙醇、异丙醇，全部重新开封新的，确保绝对无RNA酶污染，操作台用RNaseZap喷洒擦拭两遍。」
「第二组，程溪瑶、唐培，你们负责给所有的移液枪换上带滤芯的枪头，准备好离心管和冰盒。」
「师兄，亦舟，你们俩配合我，准备过柱子提取。」
江河站在超净工作台前，将转运箱打开，取出装有灭活样本的冻存管。
「开始。」
实验室内。
严肃，高效。
这群年纪轻轻的学生，此刻展现出了惊人的纪律性。
这就是培训的成果！
江河拿起一把P1000的移液枪，套上带滤芯的枪头。
「加入Trizol试剂，1毫升。」
将样本移入新的离心管中，注入Trizol。
透明的液体瞬间混合。
「室温静置5分钟，让核蛋白复合体彻底解离。」
江河看了一眼墙上的挂锺。
五分钟一到。
「加氯仿，0.2毫升。」
「盖紧管盖，剧烈振荡15秒。」
「静置3分钟。」
顾亦舟在一旁已经打开了高速冷冻离心机的盖子，温度已经预冷到了4℃。
「放入离心机，配平，12000转，15分钟。」
这15分钟极其漫长。
「滴——」
离心机停止。
江河小心翼翼取出离心管。
在冷光的照射下，管内的液体清晰地分成了三层：
底层是红色的酚氯仿相，中间是一层薄薄的白色蛋白交界面，最上层是无色的水相。
所有的病毒RNA，都溶解在这最上层的无色水相中。
江河深吸了一口气，换了一把P200的移液枪。
这一步是整个提取过程中最关键的一步。
如果吸到了中间的蛋白层或者底层的有机相，整个样本就废了。
他将手肘支撑在台面上，按下移液枪的按钮。
枪尖精准悬停在无色水相的中央，缓缓吸取了400微升的液体，移入一个全新的无酶离心管中。
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全程，江河的手没有一丝颤抖。
外科医生的定力，在这一刻展现得淋漓尽致。
陆晓林在旁边看得头皮发麻。
——哪怕是浸淫实验室多年的老研究员，悬空吸取水相时也难免会有细微的晃动，但江河的手就像是被焊死了一样，稳得可怕。
「加入等体积的异丙醇，陈浩，递冰盒。」
🅑 Q 𝙂e . 𝒞 𝒞